一、PCR實驗室的凈化級別
PCR實驗室雖沒有嚴格的凈化要求,但采用全送全排的氣流組織形式對PCR實驗來說更為適宜,如此可避免集中回風后再循環(huán)可能造成的空氣交叉污染。各個試驗區(qū)及其對應的緩沖間設置為II級,整體緩沖走廊設置為IV級。
二、?PCR 實驗室的設計參數(shù)
PCR實驗室各個試驗區(qū)及其對應緩沖間設計為II級,換氣次數(shù)應至少為12 次/每小時,整體緩沖走廊設計為IV級,換氣次數(shù)至少為8次/小時;冬季室內狀態(tài)點溫度設計為22℃,室內狀態(tài)點濕度設計為60%;夏季室內狀態(tài)點溫度設計為26℃,室內狀態(tài)點濕度設計為40%;PCR 實驗室區(qū)域的噪音統(tǒng)一設計為≤60dB (A)。
三、PCR實驗室的壓差設計
由于PCR實驗室各房間的用途各不相同,在設計時需根據(jù)各房間的功能及房間內布置的實驗設備確定其壓差,并以其為基準調整送風量和排風量。負壓房間的壓差設計為≤-5Pa,正壓房間的壓差設計為≥+5Pa。
(1)試劑儲存和準備區(qū)
該區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。由于該區(qū)實驗操作均在微環(huán)境百級的超凈工作臺內進行,應設計成微正壓房間(通過控制送風風量大于排風風量達到正壓效果),以防止外界含有核酸氣溶膠的空氣進入而造成污染。排風量設計為9次/h。
(2)標本制備區(qū)
該區(qū)主要進行的操作為樣本的保存、RNA和DNA的提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。同樣的,為了防止外界含有核酸氣溶膠的空氣進入而造成污染,該區(qū)應設計成微正壓房間。另外,此區(qū)域設有生物安全柜,設計時應加大送風風量以滿足該區(qū)的正壓需求。排風量設計為9次/h (若未達到生物安全柜最大排風量,則以生物安全柜最大排風量設計為房間排風量)。
(3)擴增反應混合物和擴增區(qū)
該區(qū)主要進行的操作為DNA的擴增、已經制備完成的DNA模板(來自于標本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自于試劑儲存和準備區(qū))制備成反應混合液。為防止大量擴增產物擴散出該區(qū)并對其他房間造成污染,該區(qū)應設計成微負壓房間(通過控制送風風量小于排風風量達到負壓效果)。排風量設計為15次/h。
(4)擴增產物分析區(qū)
該區(qū)主要進行的操作為擴增片段的測定。為避免在電泳測序的過程中擴增產物從本區(qū)擴散到其他區(qū)域,該區(qū)應同樣設計成微負壓房間。由于此區(qū)域的分析儀散熱量較大,會設置生物安全柜輔助排風,設計時應保證在不超過排風風量(滿足該區(qū)的負壓需求)的情況下適當加大送風風量。排風量設計為15 次/h (若未達到生物安全柜最大排風量,則以生物安全柜最大排風量設計為房間排風量)。
(5)各功能房間對應的緩沖間
PCR實驗室各功能房間對應的緩沖間設計成微正壓,以減少實驗區(qū)內外的空氣交換。整體緩沖走廊設計成微正壓。
四、PCR實驗室的設計方法
1)PCR實驗室凈化空調系統(tǒng)采用全送全排的氣流組織形式,以下將僅針對此種方案進行設計和闡述。整個PCR實驗區(qū)(包括整體緩沖走廊)設置一臺形式為全新風的凈化空調機組。該凈化空調機組的功能段依次為:預熱段——冬季空調計算干球溫度為-9.9℃,低于0℃,設置預熱段可以防止風機因結凍對使用造成影響,預熱至5℃即可,預熱方式采用電預熱(無條件時可采用熱水進行預熱);風機段——根據(jù)新風量計算風機功率;均流段;中效過濾段;亞高效過濾段;加熱段、表冷段——凈化空調機組采用四管制,接大樓設計預留PCR實驗區(qū)設備機房凈化用冷、熱供回水管,過渡季冷源由大樓預設風冷螺桿冷水機組(與其他凈化區(qū)共用)提供;電再熱段:加濕段——采用干蒸汽加濕的方式,加濕用蒸汽由大樓系統(tǒng)提供(無條件時可采用不滋菌、不污染的潔凈電熱式加濕器,加濕用水接大樓水系統(tǒng)給水管);出風段。
2) PCR實驗區(qū)采用上送風、下排風的氣流形式,每個房間頂部設置帶有手動調節(jié)閥和H13級別高效過濾的送風口;正壓房間下側設置帶有手動調節(jié)閥和H8級別中效過濾的排風口和靜壓箱;負壓房間下側設置帶有手動調節(jié)閥和H13級別高效過濾的排風口和靜壓箱;每個生物安全柜設置帶有H13級別高效過濾的排風口。試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應混合物和擴增區(qū)和擴增產物分析區(qū)各單獨設置一臺排風機,方便房間內壓差的調節(jié)與控制,且能避免實驗過程中出現(xiàn)交叉污染的情況。整體緩沖走廊和四個緩沖單間共同設置一臺排風機。標本制備區(qū)、擴增產物分析區(qū)均設置有生物安全柜,房間內的排風口和生物安全柜排風口改為安裝電動調節(jié)閥,并與對應的排風機的電動調節(jié)閥聯(lián)鎖,通過弱電專業(yè)設計遠程控制使房間內的壓差穩(wěn)定。
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